全血RNA提取实验
实验方法原理
红细胞裂解液选择性裂解红细胞，然后独特的裂解液/β-巯基乙醇快速裂解白细胞并使细胞RNA酶失活，再与乙醇调整结合条件，使RNA选择性吸附在离心柱上高解离盐状态的内层硅基质膜，然后通过一系列快速漂洗-离心步骤，脱蛋白液和漂洗液去除细胞代谢物、蛋白质等杂质，最后用低盐RNase free H20洗脱来自硅基质膜的纯 RNA。
实验材料
新鲜血液
试剂、试剂盒
抗凝红细胞裂解液 RLB 脱蛋白液 RW1 乙醇冲洗液 RW
仪器、耗材
制冰机 离心机 离心管 移液枪 移液器 针头 注射器 水浴
实验步骤
1. 添加 1 卷 (
2、室温放置10分钟（期间应倒置轻弹数次，以帮助红细胞裂解）。
如果 RNA 严重降解，可以在冰上裂解离心瓶，但时间可能更长才能完全裂解。
3. 12 000 rpm离心20秒，弃去红色上清，小心吸出尽可能多的上清（注意不要吸到管底的细胞团），底部留下完整的白细胞团管的。
离心后在管底应该可以看到白色的白细胞团，也可能有一些红细胞碎片和白细胞团在一起，但是如果看到大部分的红细胞团，就说明红细胞裂解不充分，应加入红细胞裂解 重悬细胞沉淀后重复步骤 2 和 3。
尽可能吸出并丢弃上清液。 过多的残留物会稀释裂解物，导致裂解物结合异常并降低产量纯度。
4. 涡旋或轻弹管壁以完全松散并重悬白细胞沉淀，加入 350 ul (
5. 用一次性1ml（带0.9mm针头）带钝针头的注射器抽取裂解液5-10次或直至获得满意的均质结果（或电动均质30秒），可剪切DNA，减少粘度和增加产量。
6. 为了更准确地估计裂解液的体积，加入等体积的70%乙醇（请先检查是否加入无水乙醇！），此时可能会出现沉淀，但不影响提取过程。 立即移液并混合，无需离心。
7. 立即将混合液（每次少于700ul，最多分两次加入）加入吸附柱RA，（吸附柱置于收集管中）离心60秒，并丢弃废液。
8. 加入700 ul去蛋白液RW1，室温放置30秒，12℃离心30秒，弃去废液。
如果DNA残留明显，可加入RW1后室温静置5分钟，然后离心。
9. 加入500ul漂洗液RW（请先检查是否加入无水乙醇）离心瓶，离心30秒，弃去废液。 添加 500 ul Rinse RW 并重复。
10. 将吸附柱RA放回空收集管中，13 000 rpm离心2分钟，尽可能去除冲洗液，以免冲洗液中残留的乙醇抑制下游反应。
11. 取出吸附柱RA，放入RNase free离心管中，根据预期RNA产量在吸附膜中部加入30-50 ul RNase（最好70-80℃加热） ℃水浴），室温放置1分钟，12000转离心1分钟。
12. 如果提取的全血>0.5ml或>2x106个白细胞，加入30-50ul RNase free water重复步骤11，合并两次洗脱液，或用第一次洗脱液加回吸附柱重复步骤一次（如果需要高 RNA 浓度）。
两次洗脱的RNA洗脱液浓度高，两次洗脱的合并洗脱液RNA得率比前者提高15-30%，但浓度较低，用户可根据需要选择需求。
防范措施
首次使用前，请在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入规定量的无水乙醇。 使用前用 DEPC 处理的水将 10X 红细胞裂解缓冲液 RLB 稀释至 1X。 操作前，将β-巯基乙醇加入RLT裂解液中至终浓度为1%，如1 ml RLT加入10 ul β-巯基乙醇。 最好立即准备这种裂解物。 准备好的 RLT 可在 4°C 下保存一个月。
其他
首次使用前，请在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入规定量的无水乙醇。 使用前用 DEPC 处理的水将 10X 红细胞裂解缓冲液 RLB 稀释至 1X。 操作前，将β-巯基乙醇加入RLT裂解液中至终浓度为1%，如1 ml RLT加入10 ul β-巯基乙醇。 最好立即准备这种裂解物。 准备好的 RLT 可在 4°C 下保存一个月。
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